Бактериофаг под микроскопом, Пожиратели бактерий: убийцы в роли спасителей
PMID Зато горизонтальный перенос часто происходит в периферическом геноме, где находятся вариабельные гены, преимущественно мороны [3] , [32]. В этой методике вместо сфокусированного пучка электронов как в электронном микроскопе используется пучок ионов гелия.
Окраска генцианвиолетом. Б - биопленка после воздействия бактериофага Staphylococcus aureus SA20, В - биопленка после воздействия коммерческого Бактериофага стафилококкового. Для лучшего понимания сущности предлагаемого изобретения, оно иллюстрируется следующими примерами осуществления.
Пример 1. Получение фаголизата штамма бактериофага Staphylococcus aureus SA Затем в клеточную культуру вносят бактериофаг Staphylococcus aureus SA20, после чего клетки продолжают инкубировать в течение 12 часов в тех же условиях. Пример 2.
Проверка литической активности штамма бактериофага Staphylococcus aureus SA20 в отношении бактерий Staphylococcus aureus или других бактерий из рода Staphylococcus. На первом этапе готовят серию разведений суспензии бактериофага Staphylococcus aureus SA20 известной концентрации в растворе 0,15 M растворе NaCl.
Затем мкл соответствующего разведения смешивают с мкл ночной культуры соответствующего штамма Staphylococcus aureus или других бактерий из рода Staphylococcus. Пятна лизиса бактериофага Staphylococcus aureus SA20 на газоне бактериальной культуры подсчитывают для определения концентрации бактериофага в анализируемой системе.
Результаты проверки литической активности бактериофага Staphylococcus aureus SA20 в отношении 44 штаммов Staphylococcus aureus и 28 штаммов других бактерий из рода Staphylococcus представлены в таблице. Из этой таблицы видно, что бактериофаг Staphylococcus aureus SA20 способен литически размножаться в бактериях 34 штаммов Staphylococcus aureus и 9 штаммов других бактерий из рода Staphylococcus.
Также из таблицы видно, что бактериофаг Staphylococcus aureus SA20 способен лизировать бактерии 10 штаммов Staphylococcus aureus и 19 штаммов других бактерий из рода Staphylococcus за счет белков-лизинов. Пример 3. Определение морфологии вирионов бактериофага Staphylococcus aureus SA20 методом электронной микрофотографии.
Исследование проводят методом негативного контрастирования. Фиксированный бактериофаг Staphylococcus aureus SA20 наносят на коллодиевые подложки, укрепленные на никелевых сетках.
На электронной микрофотографии, представленной на фиг.
Пример 4. ДНК из полученного экстракта осаждают добавлением изопропанола в количестве 0,8 от объема раствора и 5М NaCl в количестве 0,05 от объема раствора.
Смесь выдерживают 20 минут при комнатной температуре. Осадок растворяют в деионизованной воде. Пример 5.
Результаты анализа показывают, что ПЦР-фрагмент содержит последовательность гена, кодирующего альфа-субъединицу рибонуклеотидредуктазы 1b. Последовательности гена и кодируемого им белка приведены на фиг. Результаты филогенетического анализа, приведенного на фиг. Пример 6. Разрушение биопленки, сформированной бактериями Staphylococcus aureus АТСС, за счет размножения бактериофага Staphylococcus aureus SA20 в ходе литического цикла развития.
Подсчет частиц бактериофага проводят в культуральной жидкости до воздействия бактериофага Staphylococcus aureus SA20 на биопленку и после инкубации с биопленкой. Воздействие бактериофага на биопленку оценивают визуально по мутности питательной среды, а также методом световой микроскопии, окрашивая покровные стекла с биопленкой генцианвиолетом.
Результаты световой микроскопии иллюстрирует фиг. В опытном образце после инкубации биопленки с бактериофагом Staphylococcus aureus SA20 на покровном стекле виден клеточный дебрис, увеличенные в размере мертвые клетки и остатки матрикса биопленки, за счет которого клетки прикрепляются к покровному стеклу фиг. Эти результаты свидетельствуют о разрушении биопленки за счет размножения бактериофага Staphylococcus aureus SA20 в ходе литического цикла развития.
Пример 7. Разрушение биопленки, сформированной бактериями Staphylococcus capitis КЭМТК , за счет размножения бактериофага Staphylococcus aureus SA20 в ходе литического цикла развития.
Подсчет частиц бактериофага проводят в культуральной жидкости до воздействия бактериофагов и после инкубации с биопленкой. Воздействие бактериофагов на биопленку оценивают визуально по мутности питательной среды, а также методом световой микроскопии, окрашивая покровные стекла с биопленкой генцианвиолетом.
Эти результаты свидетельствуют о разрушении биопленки, сформированной Staphylococcus capitis, за счет размножения бактериофага Staphylococcus aureus SA20 в ходе литического цикла развития, что не обеспечивается прототипным бактериофагом.
Пример 8. Разрушение биопленки, сформированной бактериями клинического изолята Staphylococcus aureus КЭМТК , за счет продукции бактериофагом Staphylococcus aureus SA20 белков-лизинов.
Предварительно по биохимическим свойствам и результатам секвенирования гена 16S РНК использованный штамм определяют как Staphylococcus aureus, причем бактериофаг Staphylococcus aureus SA20 не дает фагового потомства на клетках этого штамма. Подсчет частиц бактериофага проводят в культуральной жидкости до воздействия бактериофагов на биопленку и после инкубации с биопленкой.
В опытном образце после инкубации биопленки с бактериофагом Staphylococcus aureus SA20 на покровном стекле виден клеточный дебрис и остатки матрикса биопленки, за счет которого клетки прикрепляются к покровному стеклу фиг. Эти результаты свидетельствуют о том, что разрушение биопленки произошло за счет белков-лизинов бактериофага Staphylococcus aureus SA Таким образом, впервые получен штамм бактериофага Staphylococcus aureus SA20, обладающий широким спектром литической активности в отношении бактерий рода Staphylococcus и способный разрушать биопленки, сформированные различными штаммами Staphylococcus aureus, Staphylococcus capitis, Staphylococcus epidermidis, Staphylococcus haemolyticus, Staphylococcus intermedius, Staphylococcus pseudintermedius в ходе литического цикла размножения бактериофага Staphylococcus aureus SA20 или за счет продукции литических фаговых белков-лизинов.
Madigan M. Brock Biology of Microorganisms 11th ed. Prentice Hall. ISBN Wang R. Staphylococcus epidermidis surfactant peptides promote biofilm maturation and dissemination of biofilm-associated infection in mice. Штамм бактериофага Staphylococcus aureus SA20, обеспечивающий разрушение биопленок, образуемых бактериями рода Staphylococcus, содержащий ген, кодирующий альфа-субъединицу рибонуклеотидредуктазы 1b, имеющий нуклеотидную последовательность SEQ ID NO 1, представленную на фиг.
RUC1 ru.
Bacteriophage or lytic protein derived from the bacteriophage which effective for treatment of staphylococcus aureus biofilm. Taha et al. Bacteriophage ZCKP1: a potential treatment for Klebsiella pneumoniae isolated from diabetic foot patients. Karumidze et al. Isolation and characterisation of lytic bacteriophages of Klebsiella pneumoniae and Klebsiella oxytoca.
KRB1 ko. Nasser et al. Specification of bacteriophage isolated against clinical methicillin-resistant staphylococcus aureus. Gorodnichev et al.
Novel Klebsiella pneumoniae Kspecific bacteriophages from different families: similarity of depolymerases and their therapeutic potential.
El-Telbany et al. Bacteriophages to control multi-drug resistant Enterococcus faecalis infection of dental root canals. KRA ko. CNB zh. EPB1 en. Споры сибирской язвы являются одним из самых опасных агентов для создания биологического оружия.
Его применение или утечка обычно приводит к легочной форме инфекции, для которой характерно молниеносное развитие и почти процентная смертность. Наука и техника. Найден хвостатый вирус-уничтожитель сибирской язвы. Комментарии отключены. Бактериофаги помогли создать суперантибиотик против супермикробов. Стало известно об ударах по центру принятия решений на Украине.
В Киеве уничтожен объект СБУ Россиянкам назвали способы избавиться от второго подбородка Подсчитана переплата по ипотеке в России В Госдуме предложили вооружить охрану крупных торговых центров Над российским регионом сбили украинские зенитные ракеты С Кастинг на роль Жириновского решили возобновить после ареста Кологривого Макрон назвал циничным использование теракта в «Крокусе» против Украины В России заметили «зенитную тачанку» с автоматами Калашникова Раскрыта офицерская схема отъема денег у рядовых солдат ВСУ Дания и Украина подписали меморандум об оборонных закупках
